进口牛胰岛素样生长因子-1(IGF-1)完整步骤介绍

用途：本试剂盒仅供研究使用。 　　 　　使用目的：本试剂盒用于测定牛血清、血浆及相关液体样本中胰岛素样生长因子-1(IGF-1)含量。 　 　　 　　规格：48T/96T 　　 　　检测范围：0-8ng/L 　　 　　牛胰岛素样生长因子-1(IGF-1)ELISA试剂盒实验原理 　　 　　本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中牛胰岛素样生长因子-1(IGF-1)水平。用纯化的牛 　　 　　胰岛素样生长因子-1(IGF-1)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入 　　 　　胰岛素样生长因子-1(IGF-1)，再与HRP标记的胰岛素样生长因子-1(IGF-1)抗体结合，形成 　　 　　抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下 　　 　　转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的胰岛素样生长因子 　　 　　-1(IGF-1)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样 　　 　　品中牛胰岛素样生长因子-1(IGF-1)浓度。 　　 　　操作步骤 　　 　　1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀 　　 　　释。 　　 　　32μg/L5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液 　　 　　16μg/L4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液 　　 　　8.0μg/L3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液 　　 　　4.0μg/L2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液 　　 　　2.0μg/L1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液 　　 　　2.加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、标准孔、 　　 　　待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl， 　　 　　然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽 　　 　　量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 　　 　　3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 　　 　　4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用 　　 　　5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此 　　 　　重复5次，拍干。 　　 　　6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 　　 　　7.温育：操作同3。 　　 　　8.洗涤：操作同5。 　　 　　9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色 　　 　　15分钟. 　　 　　10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。 　　 　　11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止 　　 　　液后15分钟以内进行。 　　 　　计算 　　 　　以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的 　　 　　OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标 　　 　　准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数， 　　 　　即为样品的实际浓度。 　　 　　注意事项 　　 　　1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未 　　 　　用完，板条应装入密封袋中保存。 　　 　　2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。 　　 　　3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好 　　 　　控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。 　　 　　4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值 　　 　　大于标准品孔第一孔的OD值)，请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定，计 　　 　　算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。 　　 　　5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 　　 　　6．底物请避光保存。 　　 　　7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 　　 　　8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 　　 　　9．本试剂不同批号组分不得混用。 　　 　　10.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。 　　 　　保存条件及有效期 　　 　　1．试剂盒保存：；2-8℃。 　　 　　2．有效期：6个月 (来源：中国化工仪器网)

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